Nat Methods：首次提出抗体特异性验证策略

　　2016年09月09日讯 在一项新的研究中，国际抗体验证工作小组（International Working Group on Antibody Validation, IWGAV），即一个由在蛋白生物学领域有着不同研究兴趣的国际科学家组成的独立小组于2016年9月5日宣布在Nature Methods期刊上在线公布了他们开发出的初步策略来解决抗体特异性、功能性和可重复性方面至关重要的未被满足的需求。IWGAV旨在为抗体制造者和使用者进行抗体验证而提出策略建议。

　　尽管抗体在科学研究中是最为频繁使用的工具之一，但是还没有一种综合的科学框架用于验证不同研究应用中的抗体特异性。由于失败的或不可靠的实验，据估计，仅仅在美国，对未得到充分描述的抗体的使用花费了3.5亿美元，而在全世界，花费了8亿美元。

　　论文通信作者、IWGAV主席、瑞典皇家理工学院微生物学教授Mathias Uhlén博士说，“这次公布是开发被广泛接受的用于验证抗体和确保适合于生物医学研究的高质量的始终如一的抗体的标准方面迈出的重要的第一步。我们期待接受来自更广泛的抗体用户、发行者、资助机构和制造者的反馈以便有助强化这种初始提出的策略和确保这些必需的生物医学研究工具的可靠性。”

　　IWGAV鉴定出5个“概念支柱（conceptual pillar）”来指导在特定研究应用中的抗体验证：

　　（1）基因策略：测量对照细胞或组织中的相关信号，其中在对照细胞或组织中，利用CRISPR/Cas或RNAi等技术对靶基因进行敲除（knock out）或敲降（knock down，即降低靶基因表达）。

　　（2）正交策略：在多种样品中使用一种与抗体无关的定量方法，然后研究基于抗体的定量方法与抗体无关的定量方法之间的关联性。

　　（3）独立抗体策略：使用两种或以上识别靶蛋白上不同抗原决定簇的抗体，然后通过比较性的和定量的分析来证实抗体特异性。

　　（4）标记蛋白表达：对内源性靶基因进行修饰，加入一个亲和标签或一种荧光蛋白。来自标记蛋白的信号能够与基于抗体的方法的检测结果相关联。

　　（5）免疫免疫捕获后进行质谱分析：偶联免疫捕获，即通过与一种靶蛋白特异性的抗体的结合从溶液中分离出靶蛋白，然后通过质谱分析鉴定出与这种抗体直接相互作用的蛋白，以及可能与靶蛋白形成复合物的蛋白。

　　尽管上述的每个概念支柱都可能提供抗体特异性的证据，但是IWGAV推荐使用多个概念支柱来声称一种特定的抗体在一种特定的应用中得到很好地验证。这项新的研究也包括建议抗体制造者和使用者在一段时间后确保抗体的可重复性。

　　这种初步提出的策略旨在提供一种用于抗体验证的科学基础，和提供鼓励广泛地采用关于抗体使用的综合指导方针的可重复性标准。然而，这将需要来自全球研究人员和抗体制造者的持续反馈。这些利益相关者将无一不在采用和执行这种初步提出的策略中发挥着重要的作用。