遗传学大牛PNAS公布一项最新测序技术

　　2016年10月15日讯 未来个性化医学，医生可能仅仅通过分析一份唾液样品，就能快速收集到患者谋者疾病的患病风险，以及最适合他的治疗方式。然而目前的新一代技术依然是一个很费钱的事。

　　来自哈佛大学Wyss研究所的著名遗传学家George M. Church开发了一种新的电子DNA测序平台，这一平台基于生物工程纳米孔，能帮助克服现有测序技术的局限性。这一研究成果公布在10月12日《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志在线版上。

　　“在这项研究中，我们探索了一种高扩展性，精确，单分子DNA测序平台，可以利用环境中广泛的基因组样品，低成本，长DNA读长，从而可以用于转化精确医学上，”Church说。

　　自上世纪90年代，Church等人就一直致力于寻找可以利用纳米孔测序-合成（Nanopore-SBS）的方法来替代DNA测序的技术。将单链DNA拉过蛋白孔，检测碱基穿过时电导的微小改变，这就是纳米孔测序的这基础理论，这一理论发现已经有十几年历史了。从第一篇论文到纳米孔测序的成形，这条道路并不是一帆风顺的。

　　今年上半年，Church与哥伦比亚大学的车靖岳（Jingyue Ju）合作，开发了基于纳米孔的单分子边合成边测序（SBS）系统。他们将聚合酶拴系在α-hemolysin纳米孔上，在芯片上排出纳米孔阵列。随后他们用多重化的纳米孔传感器搭建了高通量的测序平台。这个平台使用多聚物标记的核苷酸，可以在单分子水平上对多个DNA模板进行平行测序。研究人员通过这种方式获得了实时的单分子测序数据，分辨率达到了单碱基水平。

　　“纳米孔测序的一个关键问题在于缺乏准确性。这是因为互补DNA链的合成是向着纳米孔接近，这会在孔中产生冗杂电子信号，导致不再与单个原初DNA模版分子相符。但是我们现在开发出了新的测序机器，能获得可靠的测序结果，也可以用于不同的DNA模版，并且能与上百个纳米孔组合，”文章第一作者之一，Church实验室的博士后研究员P. Benjamin Stranges说。

　　这个新的测序机器包括7个蛋白质亚基，共同组成了一个复杂的纳米孔，其中只有一个可以在正确的孔道开放时间，正确的位置特异性与DNA聚合酶共轭。

　　此外，这一引擎还能同时在同一张芯片上单独分析多个DNA序列，这比传统的低通量测序技术要快，要便宜，而且通量也更加高，可以用于降低临床的测序成本。

　　“我们能识别出79%-99%之间的正确核苷酸，背景噪音捕获少于1.2%，”另外一位第一作者Mirkó Palla说，“这是纳米孔-SBS系统的一个显著进步。”

　　“这项技术是一个典型的例子，即我们对于活体生物在分子水平上的深入了解，能促进巨大的技术进步，”Wyss研究院主任Donald Ingbe博士说，将生物大分子机器与合成膜结合在一起，然后整合到常规电子机器中去，就能创造一种全新的低成本基因诊断技术。