南京大学发布无序列限制的DNA编辑新工具

　　2016年09月15日讯 内切酶经过改造可以成为强大的DNA编辑工具，比如ZFN、TALEN、风头正劲的CRISPR-Cas系统和引起争议的NgAgo技术。不过这些技术都是通过序列识别来实现靶向切割的，会受到序列偏好的限制。

　　南京大学的研究团队九月十五日在Genome Biology杂志上发表了一项突破性成果。他们开发了结构引导的DNA编辑新技术，不再受到靶序列的限制。这篇文章的通讯作者是南京大学医学院附属金陵医院的周国华（Guohua Zhou）研究员、南京大学模式动物研究所的赵庆顺（Qingshun Zhao）教授和朱敏生（Minsheng Zhu）教授。

　　FEN1（flap endonuclease-1）是一种识别3’ flap结构的内切酶。研究人员将FEN1与Fn1（Fok I）的剪切结构域结合起来，制造了结构引导的DNA编辑工具--SGN。SGN（structure-guided endonuclease）能够识别靶序列与向导DNA（gDNA）形成的3’ flap结构，通过Fn1二聚化对靶序列进行切割。研究显示，一对gDNA可以引导SGN在斑马鱼胚胎的基因组中正确切割报告基因和内源基因。这项研究指出，SGN能特异性识别和捕获目标，准确切割任何DNA序列。

　　CRISPR-Cas原本是细菌抵御病毒的重要武器，现在它已经成为了基因组编辑的强大工具。CRISPR-Cas不仅操作简便，而且还有着很强的可扩展性，被广泛应用到各种生物中，催生了大量的研究成果。CRISPR激活（CRISPRa）和CRISPR抑制（CRISPRi）特别适合分析非编码RNA的具体功能。前不久，The Scientist杂志联合CRISPR的开发者和使用者共同编写了使用CRISPRa和CRISPRi的入门指南，帮助研究者们更好的研究和调节基因组的编码和非编码区域。

　　Molecular Cell杂志此前曾推出技术特刊，介绍了生物学领域近年来出现的新兴技术。其中一篇文章对RNAi、TALEN和CRISPR这三大基因组编辑工具的核心技术进行了全面比较，并且为基因功能研究提供了一份实用指南。研究者们可以根据自己的需要，简单直观的找到最适合自己的技术。

　　今年五月，河北科技大学的生物学家韩春雨（Chunyu Han）在Nature Biotechnology杂志上发布了一种可以替代CRISPR-Cas的基因组编辑技术，NgAgo。他的研究团队证实，NgAgo酶可以实现DNA引导的哺乳动物基因组编辑。这项成果一经发表就引起了国内外的强烈关注，至今争议不断。